Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 20.05.2009 N 488 "Об утверждении инструкции по лабораторной диагностике сифилиса"
Архив ноябрь 2011 года
<< Назад |
<<< Главная страница
Стр. 2
| Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 | ¦качества ¦- взятие первичной пробы; ¦
¦ ¦- правильность маркировки первичной пробы; ¦
¦ ¦- исправность микроскопа; ¦
¦ ¦- соответствие показателей внешней среды: температуры ¦
¦ ¦воздуха, влажности, освещенности рабочего места, тем ¦
¦ ¦условиям, которые необходимы для проведения ¦
¦ ¦исследования. ¦
¦ ¦На аналитическом этапе оценивается: ¦
¦ ¦- выполнение методики исследования в соответствии с ¦
¦ ¦инструкцией. ¦
¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦
¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦
¦ ¦исследования; ¦
¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦
¦ ¦назначившего исследование ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦11. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦
¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦
¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦
¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦
¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦
¦ ¦26-01-01. ¦
¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦
¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦
¦ ¦здравоохранения". ¦
¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦
¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦
¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦
¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦
¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦
¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦
¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦
¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦
¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦
¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦
¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦
¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦
¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦
¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦
¦ ¦персонала". ¦
¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦
¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦
¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦
¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦12. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦
¦персонала ¦ ¦
-------------------+-------------------------------------------------------
Приложение 5
к приказу Министерства
здравоохранения
Республики Беларусь
20.05.2009 N 488
МЕТОДИКА РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ С КАРДИОЛИПИНОВЫМ АНТИГЕНОМ <*>
-------------------+-------------------------------------------------------
¦1. Наименование ¦Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном ¦
¦метода ¦(РМП) ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦2. Принцип метода ¦Образование комплекса антиген-антитело при ¦
¦ ¦взаимодействии сыворотки, плазмы, СМЖ больного ¦
¦ ¦сифилисом и эмульсии кардиолипинового антигена, ¦
¦ ¦имеющего вид преципитата белого цвета ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦3. Биологический ¦Нативная инактивированная сыворотка крови. ¦
¦материал для ¦Спинномозговая жидкость (СМЖ). ¦
¦исследования ¦Плазма крови ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, плазмой, СМЖ ¦
¦транспортировки ¦транспортируются в лабораторию в специальном закрытом ¦
¦проб ¦контейнере при температуре +2 - 25 °C. При ¦
¦ ¦невозможности немедленной доставки пробы в ¦
¦ ¦лабораторию пробы хранятся в холодильнике при ¦
¦ ¦температуре +2 - 8 °C не более 24 часов. ¦
¦ ¦В лаборатории пробы исследуются в течение 24 часов, ¦
¦ ¦при необходимости сохранения образца до 72 часов ¦
¦ ¦отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦
¦ ¦+2 - 8 °C. При необходимости хранения биологического ¦
¦ ¦материала в течение более длительных сроков производят¦
¦ ¦замораживание сыворотки, СМЖ при разделении его на ¦
¦ ¦несколько дублирующих проб по 0,5 - 1,0 мл в ¦
¦ ¦маркированных пробирках типа Эппендорф. Замораживание ¦
¦ ¦при температуре -18 - 20 °C позволяет хранить образцы ¦
¦ ¦в течение 1 - 1,5 месяцев, при низких температурах ¦
¦ ¦-70 °C срок их хранения практически не лимитируется. ¦
¦ ¦Образцы с плазмой исследуются в день взятия, хранению ¦
¦ ¦не подлежат ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦5. Подготовка проб¦Для получения сыворотки образцы крови помещаются в ¦
¦к исследованию ¦термостат при +37 °C на 15 - 30 минут или оставляются ¦
¦ ¦при комнатной температуре для образования сгустка ¦
¦ ¦фибрина, затем помещаются в холодильник при +4 °C на ¦
¦ ¦30 минут, после чего пробирки с венозной кровью ¦
¦ ¦подвергаются центрифугированию в течение 10 минут при ¦
¦ ¦скорости вращения ротора 1000 - 3000 оборотов в ¦
¦ ¦минуту. Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦
¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦
¦ ¦для проведения исследования производится при комнатной¦
¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦
¦ ¦холодильника. Для гомогенизации содержимого пробирки ¦
¦ ¦после оттаивания его в обязательном порядке несколько ¦
¦ ¦раз тщательно перемешиваются перед выполнением ¦
¦ ¦исследования. ¦
¦ ¦Образцы, в которых сформирован кровяной сгусток и ¦
¦ ¦достаточное количество сыворотки, могут быть ¦
¦ ¦исследованы без подготовки. ¦
¦ ¦Перед проведением исследования образцы сыворотки ¦
¦ ¦подвергают инактивированию при +56 °C в течение 30 ¦
¦ ¦минут. ¦
¦ ¦Пробирки со стабилизированной кровью (плазма) в ¦
¦ ¦лаборатории отстаивают перед исследованием при ¦
¦ ¦комнатной температуре в течение 30 - 60 минут или ¦
¦ ¦центрифугируют 7 - 10 минут при скорости вращения ¦
¦ ¦1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦6. Оборудование, ¦1) Набор для РМП. ¦
¦инструменты и ¦2) Круглодонный иммунологический планшет для ¦
¦материалы ¦макротитрования. ¦
¦ ¦3) Дозаторы пипеточные переменного объема, ¦
¦ ¦позволяющие отбирать 50 мкл, 150 мкл, 2 мл и 10 мл ¦
¦ ¦жидкости. ¦
¦ ¦4) Наконечники для дозатора универсальные. ¦
¦ ¦5) Пробирки (стеклянные или одноразовые). ¦
¦ ¦6) Физиологический раствор. ¦
¦ ¦7) Шейкер (орбитальный ротор). ¦
¦ ¦8) Центрифуга с горизонтальным ротором, развивающая ¦
¦ ¦ускорение 1000 - 3000 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦9) Источник искусственного направленного света. ¦
¦ ¦10) Стаканы мерные химические. ¦
¦ ¦11) Вата медицинская гигроскопическая. ¦
¦ ¦12) Перекись водорода. ¦
¦ ¦13) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦
¦ ¦14) Маркер. ¦
¦ ¦15) Средства индивидуальной защиты персонала ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦7. Реагенты ¦Набор для РМП: ¦
¦ ¦- спиртовой раствор кардиолипинового антигена ¦
¦ ¦(холестерин - 0,98%, кардиолипин - 0,03%, лецитин - ¦
¦ ¦0,27% в абсолютизированном этиловом спирте); ¦
¦ ¦- холинхлорид 70%; ¦
¦ ¦- 0,9% раствор хлорида натрия (физиологический ¦
¦ ¦раствор) ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦
¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °С в течение 30 минут. ¦
¦ ¦В случае выпадения кристаллов во флаконах с раствором ¦
¦ ¦холинхлорида прогреть их при температуре +37 +/- 1 °C ¦
¦ ¦до полного растворения кристаллов, после чего флаконы ¦
¦ ¦интенсивно встряхнуть. ¦
¦ ¦Приготовление эмульсии кардиолипинового антигена: ¦
¦ ¦- в пробирку внести 2,0 мл свежеприготовленного ¦
¦ ¦физиологического раствора, затем добавить равное ¦
¦ ¦количество спиртового раствора антигена ¦
¦ ¦кардиолипинового для РМП, быстро и тщательно ¦
¦ ¦перемешать содержимое пробирки. При смешивании раствор¦
¦ ¦становится непрозрачным, образуются хлопья белого ¦
¦ ¦цвета; ¦
¦ ¦- смесь оставить при температуре +20 °C на 30 минут; ¦
¦ ¦- для осаждения липидов смесь центрифугировать при ¦
¦ ¦1500 оборотов в минуту в течение 15 минут; ¦
¦ ¦- надосадочную жидкость удалить; ¦
¦ ¦- к 30,0 мл изотонического раствора хлорида натрия ¦
¦ ¦добавить 5 мл 70% раствора холинхлорида. Раствор ¦
¦ ¦перемешать и использовать в течение 2 недель, хранить ¦
¦ ¦при температуре +2 - 8 °C; ¦
¦ ¦- к осадку антигена кардиолипинового добавить 7 мл ¦
¦ ¦приготовленного раствора холинхлорида и тщательно ¦
¦ ¦перемешать; ¦
¦ ¦- готовую эмульсию кардиолипинового антигена хранить ¦
¦ ¦при температуре +2 - 8 °C без доступа света, ¦
¦ ¦использовать в течение срока, указанного ¦
¦ ¦производителем. ¦
¦ ¦Для приготовления большего количества эмульсии ¦
¦ ¦рекомендуется ее готовить не в одной пробирке или ¦
¦ ¦большом флаконе, а в нескольких пробирках, внося в ¦
¦ ¦каждую из них по 2 мл антигена. ¦
¦ ¦В иных случаях необходимо следовать инструкции ¦
¦ ¦производителя ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦9. Процедура ¦Планшет для макротитрования размечается для проведения¦
¦анализа ¦анализа, для каждой пробы выделяется 1 лунка. ¦
¦ ¦Качественный вариант: ¦
¦ ¦В лунку планшета для макротитрования внести по 150 мкл¦
¦ ¦исследуемых образцов и добавить 50 мкл эмульсии ¦
¦ ¦кардиолипинового антигена. Перед использованием ¦
¦ ¦эмульсию кардиолипинового антигена тщательно ¦
¦ ¦ресуспензировать. Содержимое планшета тщательно ¦
¦ ¦перемешать путем встряхивания на шейкере в течение 5 ¦
¦ ¦минут. В каждую лунку добавить 150 мкл изотонического ¦
¦ ¦раствора хлорида натрия, перемешать. Учет реакции ¦
¦ ¦проводить через 5 минут. ¦
¦ ¦Все образцы биологического материала, показавшие при ¦
¦ ¦скрининге положительные результаты, необходимо ¦
¦ ¦исследовать в количественном варианте РМП. ¦
¦ ¦Количественный вариант: ¦
¦ ¦- в лунки иммунологического планшета со 2-й по 8-ю ¦
¦ ¦(10-ю) вносят по 150 мкл свежеприготовленного ¦
¦ ¦физиологического раствора хлорида натрия; ¦
¦ ¦- в 1-ю и 2-ю лунки ряда вносят по 150 мкл ¦
¦ ¦исследуемого образца биологического материала. ¦
¦ ¦Многократным пипетированием во второй лунке ¦
¦ ¦перемешивают содержимое и переносят 150 мкл ¦
¦ ¦полученного разведения (1:2) в третью лунку; ¦
¦ ¦- данную операцию повторяют во всех лунках ряда, по ¦
¦ ¦окончании разведения из последней лунки избыток ¦
¦ ¦материала 150 мкл удаляют; таким образом, получают ¦
¦ ¦серию разведений: от цельного биологического материала¦
¦ ¦к 1:2, 1:4, ... и до 1:128 (8-я лунка) или 1:512 (10-я¦
¦ ¦лунка); ¦
¦ ¦- во все лунки каждого ряда добавляют по 50 мкл хорошо¦
¦ ¦ресуспензированной эмульсии кардиолипинового антигена,¦
¦ ¦помещают планшет для постоянного перемешивания на ¦
¦ ¦горизонтальную площадку орбитального шейкера на 5 ¦
¦ ¦минут. По окончании процедуры во все лунки вносят по ¦
¦ ¦150 мкл физиологического раствора и через 5 минут ¦
¦ ¦учитывают результаты исследования ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦10. Учет и оценка ¦Учет результатов производится в проходящем свете при ¦
¦результата ¦освещенности не ниже 300 люкс по наличию в реакционной¦
¦ ¦смеси преципитатов (хлопьев) белого цвета по системе ¦
¦ ¦"четырех плюсов": ¦
¦ ¦- крупные хлопья преципитата белого цвета ¦
¦ ¦распределяются равномерно по всему объему лунки либо ¦
¦ ¦имеют тенденцию к расположению по периферической части¦
¦ ¦лунки, при этом реакционная среда полностью прозрачная¦
¦ ¦- результат "резко положительный 4+"; ¦
¦ ¦- хлопья средней величины распределены по всему объему¦
¦ ¦лунки, реакционная среда практически прозрачна - ¦
¦ ¦результат "положительный 3+"; ¦
¦ ¦- мелкие хлопья преципитата распределены по объему ¦
¦ ¦лунки, реакционная среда имеет белесоватый оттенок - ¦
¦ ¦результат "слабоположительный - 2+ или 1+"; ¦
¦ ¦- наличие очень мелких хлопьев, сомнение в наличии ¦
¦ ¦преципитата; при покачивании планшета частицы антигена¦
¦ ¦демонстрируют перламутровые переливы реакционной среды¦
¦ ¦- результат "сомнительный"; ¦
¦ ¦- преципитата нет, реакционная среда непрозрачная, при¦
¦ ¦покачивании планшета частицы кардиолипинового антигена¦
¦ ¦перемещаются, формируя перламутровые переливы белого ¦
¦ ¦цвета в центре лунки, - результат "отрицательный". ¦
¦ ¦Учет количественного варианта реакции производят по ¦
¦ ¦стандартной методике. При этом титром антител считают ¦
¦ ¦последнее разведение, где обнаружен преципитат ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦
¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦
¦ ¦требованиями; ¦
¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦
¦ ¦в лабораторию; ¦
¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦
¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦
¦ ¦- качество биологического материала. Запрещается ¦
¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦
¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦
¦ ¦образцов; ¦
¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦
¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦
¦ ¦- соответствие показателей внешней среды: температура ¦
¦ ¦воздуха, влажность; ¦
¦ ¦- качество лабораторной посуды. ¦
¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦
¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦
¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦
¦ ¦(отрицательные, положительные, слабоположительные ¦
¦ ¦сыворотки); ¦
¦ ¦- соблюдение температурного режима и времени ¦
¦ ¦инактивирования образца; ¦
¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦
¦ ¦инструкцией производителя; ¦
¦ ¦- учет результатов с контрольным материалом и ¦
¦ ¦испытуемым образцом в соответствии с официально ¦
¦ ¦признанными критериями. ¦
¦ ¦На постаналитическом этапе оценивается: ¦
¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦
¦ ¦исследования; ¦
¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦
¦ ¦назначившего исследование ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦
¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦
¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦
¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦
¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦
¦ ¦26-01-01. ¦
¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦
¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦
¦ ¦здравоохранения". ¦
¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦
¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦
¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦
¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦
¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦
¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦
¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦
¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦
¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦
¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦
¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦
¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦
¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦
¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦
¦ ¦персонала". ¦
¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦
¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦
¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦
¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦
¦персонала ¦ ¦
-------------------+-------------------------------------------------------
--------------------------------
<*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя.
Приложение 6
к приказу Министерства
здравоохранения
Республики Беларусь
20.05.2009 N 488
МЕТОДИКА РЕАКЦИИ БЫСТРЫХ ПЛАЗМЕННЫХ РЕАГИНОВ <*>
-------------------+-------------------------------------------------------
¦1. Наименование ¦Реакция быстрых плазменных реагинов (RPR) ¦
¦метода ¦ ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦2. Принцип метода ¦Образование комплекса "антиген-антитело", имеющего вид¦
¦ ¦флоккулята черного цвета, при взаимодействии ¦
¦ ¦сыворотки, плазмы или СМЖ больного сифилисом и ¦
¦ ¦суспензии кардиолипинового антигена с древесным углем ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦
¦материал для ¦Плазма крови. ¦
¦исследования ¦Спинномозговая жидкость (СМЖ) ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, плазмой, СМЖ ¦
¦транспортировки ¦транспортируются в лабораторию в специальном закрытом ¦
¦проб ¦контейнере при температуре +2 - 25 °C. При ¦
¦ ¦невозможности немедленной доставки пробы хранятся в ¦
¦ ¦холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более ¦
¦ ¦24 часов. ¦
¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦
¦ ¦часов. При необходимости сохранения пробы до 72 часов ¦
¦ ¦отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦
¦ ¦+2 - 8 °C. ¦
¦ ¦При необходимости хранения проб в течение более ¦
¦ ¦длительных сроков в лаборатории производят их ¦
¦ ¦замораживание в маркированных пробирках типа ¦
¦ ¦Эппендорф, предварительно разделив первичную пробу на ¦
¦ ¦несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 мл. Замораживание ¦
¦ ¦при температуре -18 - 20 °C позволяет хранить пробы в ¦
¦ ¦течение 1 - 1,5 месяцев; при температуре -70 °C срок ¦
¦ ¦хранения не лимитируется. ¦
¦ ¦Образцы с плазмой исследуются в день взятия, хранению ¦
¦ ¦не подлежат ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦
¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦
¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦
¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦
¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦
¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦
¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦
¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦
¦ ¦для проведения исследования производят при комнатной ¦
¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦
¦ ¦холодильника. Перед выполнением исследования после ¦
¦ ¦оттаивания для гомогенизации содержимого пробирки его ¦
¦ ¦несколько раз тщательно перемешивают. ¦
¦ ¦Перед проведением исследования образцы сыворотки могут¦
¦ ¦быть инактивированы при +56 °C в течение 30 минут или ¦
¦ ¦исследоваться без предварительной инактивации в ¦
¦ ¦зависимости от требований производителя. ¦
¦ ¦Пробирки со стабилизированной кровью (плазма) в ¦
¦ ¦лаборатории отстаивают перед исследованием при ¦
¦ ¦комнатной температуре в течение 30 - 60 минут или ¦
¦ ¦центрифугируют 7 - 10 минут при скорости вращения ¦
¦ ¦1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦6. Оборудование, ¦1) Набор для RPR. ¦
¦инструменты и ¦2) Дозаторы пипеточные переменного объема, ¦
¦материалы ¦позволяющие отбирать 50 мкл, 16 мкл жидкости. ¦
¦ ¦3) Наконечники для дозатора универсальные. ¦
¦ ¦4) Пластиковые палочки, если они не входят в состав ¦
¦ ¦набора. ¦
¦ ¦5) Маркер. ¦
¦ ¦6) Пробирки (стеклянные или одноразовые). ¦
¦ ¦7) Орбитальный ротор. ¦
¦ ¦8) Центрифуга с горизонтальным ротором, развивающая ¦
¦ ¦ускорение 1000 - 3000 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦9) Перекись водорода. ¦
¦ ¦10) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦
¦ ¦11) Средства индивидуальной защиты персонала. ¦
¦ ¦12) Дезинфицирующие растворы, разрешенные к применению¦
¦ ¦Министерством здравоохранения Республики Беларусь ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦7. Реагенты ¦Набор для RPR: ¦
¦ ¦- готовая к применению суспензия кардиолипинового ¦
¦ ¦антигена, сорбированного на мелкодисперсных частицах ¦
¦ ¦угля; ¦
¦ ¦- положительная контрольная сыворотка ¦
¦ ¦(стабилизированная инактивированной сывороткой крови ¦
¦ ¦человека); ¦
¦ ¦- отрицательная контрольная сыворотка ¦
¦ ¦(стабилизированная инактивированной сывороткой крови ¦
¦ ¦человека); ¦
¦ ¦- картонные или пластиковые карточки с выдавленными ¦
¦ ¦неглубокими (18 мм) лунками для проведения в них ¦
¦ ¦реакции; ¦
¦ ¦- диспенсор со съемной иглой для дозированного ¦
¦ ¦раскапывания суспензии антигена; ¦
¦ ¦- пластиковые палочки для распределения пробы по ¦
¦ ¦поверхности карточки ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦
¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °C в течение 30 минут. ¦
¦ ¦Произвести маркировку карточки, предназначенной для ¦
¦ ¦выполнения исследования. ¦
¦ ¦Ампулу (флакон) с кардиолипиновым антигеном тщательно ¦
¦ ¦встряхнуть, при необходимости перелить содержимое в ¦
¦ ¦диспенсер, надеть дозирующую иглу ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦9. Процедура ¦Качественный вариант: ¦
¦анализа ¦- пипеточным дозатором набрать по 50 мкл контрольных и¦
¦ ¦испытуемых проб сыворотки (плазмы крови или ¦
¦ ¦спинномозговой жидкости) и внести в соответствующую ¦
¦ ¦лунку карточки; ¦
¦ ¦- этим же наконечником или индивидуальной пластиковой ¦
¦ ¦палочкой распределить образец биологического материала¦
¦ ¦внутри очерченной зоны лунки; ¦
¦ ¦- наконечник и палочку сбросить в емкость с ¦
¦ ¦дезинфицирующим раствором; ¦
¦ ¦- в каждую лунку добавить по одной капле (или по 16 ¦
¦ ¦мкл) хорошо ресуспензированного кардиолипинового ¦
¦ ¦антигена; ¦
¦ ¦- карточку поместить на платформу горизонтального ¦
¦ ¦шейкера (ротора) для постоянного перемешивания ¦
¦ ¦содержимого лунок в течение 8 минут при скорости ¦
¦ ¦вращения 150 оборотов в минуту; ¦
¦ ¦- через 8 минут приступить к учету результатов ¦
¦ ¦реакции. ¦
¦ ¦Количественный вариант: ¦
¦ ¦- в количественном варианте исследуются все пробы, ¦
¦ ¦показавшие при скрининге положительные или ¦
¦ ¦слабоположительные результаты; ¦
¦ ¦- в лунки карточки со 2-й по 5-ю (для проб со ¦
¦ ¦слабоположительным результатом качественного ¦
¦ ¦исследования) или 10-ю внести по 50 мкл ¦
¦ ¦свежеприготовленного изотонического раствора натрия ¦
¦ ¦хлорида; ¦
¦ ¦- в первую и вторую лунки карточки внести по 50 мкл ¦
¦ ¦исследуемого образца биологического материала; ¦
¦ ¦- многократным пипетированием во второй лунке ¦
¦ ¦перемешать содержимое, стараясь избежать образования ¦
¦ ¦пены; ¦
¦ ¦- перенести 50 мкл полученного разведения (1:2) в ¦
¦ ¦третью лунку; ¦
¦ ¦- данную операцию повторять последовательно во всех ¦
¦ ¦лунках карточки, из последней лунки 50 мкл удалить в ¦
¦ ¦емкость с дезинфицирующим раствором (получают серию ¦
¦ ¦разведений: от цельного биологического материала к ¦
¦ ¦1:2, 1:4, ... до 1:16 (5-я лунка) или до 1:512 (10-я ¦
¦ ¦лунка)); ¦
¦ ¦- во все лунки карточки добавить по 16 мкл хорошо ¦
¦ ¦ресуспензированной суспензии кардиолипинового ¦
¦ ¦антигена, поместить планшет для постоянного ¦
¦ ¦перемешивания на горизонтальную площадку орбитального ¦
¦ ¦шейкера на 8 минут ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦10. Учет и оценка ¦Карточку расположить на столе или держать в руках и ¦
¦результата ¦слегка покачивать, учет результатов производится ¦
¦ ¦визуально (для более четкой регистрации разрешается ¦
¦ ¦применять лупу двукратного увеличения). ¦
¦ ¦Произвести оценку результатов с положительным и ¦
¦ ¦отрицательным контролями. При несоответствии ¦
¦ ¦результатов исследования контролей заявленным ¦
¦ ¦производителем набора результаты исследования ¦
¦ ¦аналитической серии регистрации не подлежат, тест ¦
¦ ¦провести заново. ¦
¦ ¦Критерием позитивности является образование в ¦
¦ ¦исследуемой реакционной смеси частиц флоккулята ¦
¦ ¦различной величины и просветления реакционной среды: ¦
¦ ¦- крупные и средней величины агрегаты угольных частиц ¦
¦ ¦черного цвета располагаются по всему объему лунки, ¦
¦ ¦имеют тенденцию к расположению ближе к периферической ¦
¦ ¦части лунки, реакционная среда практически полностью ¦
¦ ¦прозрачная - результат "положительный"; ¦
¦ ¦- редкие и мелкие агрегаты угольных частиц, хлопья ¦
¦ ¦преципитата распределены по периферии реакционной ¦
¦ ¦лунки, реакционная среда имеет гомогенную структуру - ¦
¦ ¦результат "слабоположительный"; ¦
¦ ¦- видимые агрегаты угольных частиц в пробе ¦
¦ ¦отсутствуют, реакционная среда гомогенной структуры ¦
¦ ¦либо частицы угля собираются в центральной части ¦
¦ ¦лунки, формируя пятно черного цвета, - результат ¦
¦ ¦"отрицательный". ¦
¦ ¦Учет результатов количественного варианта производят ¦
¦ ¦по стандартной методике. Титром антител считают ¦
¦ ¦последнее разведение, показавшее положительный ¦
¦ ¦результат при RPR-тестировании. ¦
¦ ¦Если производителем предусмотрена оценка позитивности ¦
¦ ¦по системе плюсов "+", необходимо следовать инструкции¦
¦ ¦производителя, предварительно уведомив лечащего врача ¦
¦ ¦о порядке учета и интерпретации результатов ¦
¦ ¦исследования ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦
¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦
¦ ¦требованиями; ¦
¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦
¦ ¦в лабораторию; ¦
¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦
¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦
¦ ¦- качество биологического материала (запрещается ¦
¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦
¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦
¦ ¦образцов); ¦
¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦
¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦
¦ ¦- соответствие показателей внешней среды: температура ¦
¦ ¦воздуха, влажность; ¦
¦ ¦- качество лабораторной посуды. ¦
¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦
¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦
¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦
¦ ¦(отрицательные, положительные, слабоположительные ¦
¦ ¦сыворотки); ¦
¦ ¦- соблюдение температурного режима и времени ¦
¦ ¦инактивирования образца; ¦
¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦
¦ ¦инструкцией производителя; ¦
¦ ¦- учет результатов с контрольным материалом и ¦
¦ ¦испытуемым образцом в соответствии с официально ¦
¦ ¦признанными критериями. ¦
¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦
¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦
¦ ¦исследования; ¦
¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦
¦ ¦назначившего исследование ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦
¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦
¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦
¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦
¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦
¦ ¦26-01-01. ¦
¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦
¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦
¦ ¦здравоохранения". ¦
¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦
¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦
¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦
¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦
¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦
¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦
¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦
¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦
¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦
¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦
¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦
¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦
¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦
¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦
¦ ¦персонала". ¦
¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦
¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦
¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦
¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦
¦персонала ¦ ¦
-------------------+-------------------------------------------------------
--------------------------------
<*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя.
Приложение 7
к приказу Министерства
здравоохранения
Республики Беларусь
20.05.2009 N 488
МЕТОДИКА ВЫЯВЛЕНИЯ СУММАРНЫХ АНТИТЕЛ (ИЛИ АНТИТЕЛ ОДНОГО КЛАССА) К TREPONEMA PALLIDUM В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, ПЛАЗМЕ, СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА <*>
-------------------+-------------------------------------------------------
¦1. Наименование ¦Выявление суммарных антител (или антител одного ¦
¦метода ¦класса) к Treponema pallidum в сыворотке крови, ¦
¦ ¦плазме, ликворе методом иммуноферментного анализа ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦2. Принцип метода ¦Образование комплекса антиген-антитело на твердофазном¦
¦ ¦носителе в присутствии конъюгата, меченного ферментом,¦
¦ ¦хромогена, изменение рН и окрашивания реагентной ¦
¦ ¦смеси, интенсивность которого пропорциональна ¦
¦ ¦концентрации антител ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦
¦материал для ¦Плазма крови. ¦
¦исследования ¦Спинномозговая жидкость ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, сывороткой, плазмой, ликвором ¦
¦транспортировки ¦транспортируются в лабораторию в специальном закрытом ¦
¦проб ¦контейнере при температуре +2 - 25 °C. ¦
¦ ¦При невозможности немедленной доставки пробы хранятся ¦
¦ ¦в холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более 24 ¦
¦ ¦часов. ¦
¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦
¦ ¦часов. При необходимости сохранения образца до 72 ¦
¦ ¦часов отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦
¦ ¦+2 - 8 °C. ¦
¦ ¦При необходимости хранения биологического материала в ¦
¦ ¦течение более длительных сроков в лаборатории ¦
¦ ¦производят замораживание проб в маркированных ¦
¦ ¦пробирках типа Эппендорф, предварительно разделив ¦
¦ ¦первичную пробу на несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 ¦
¦ ¦мл. Замораживание при температуре -18 - 20 °C ¦
¦ ¦позволяет хранить образцы в течение 1 - 1,5 месяцев, ¦
¦ ¦при температуре -70 °C срок хранения не лимитируется. ¦
¦ ¦Первичные пробы с плазмой исследуются в течение 24 ¦
¦ ¦часов с момента отбора, хранению не подлежат ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦
¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦
¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦
¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦
¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦
¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦
¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦
¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦
¦ ¦для проведения исследования производят при комнатной ¦
¦ ¦температуре или при температуре +2 - 8 °C бытового ¦
¦ ¦холодильника. Для гомогенизации содержимого пробирки ¦
¦ ¦после оттаивания его несколько раз тщательно ¦
¦ ¦перемешивают перед выполнением исследования. ¦
¦ ¦Пробирки со стабилизированной кровью (плазма) в ¦
¦ ¦лаборатории центрифугируют 7 - 10 минут при скорости ¦
¦ ¦вращения 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦Подготовка проб СМЖ не проводится ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦6. Оборудование, ¦1) Набор реактивов для проведения иммуноферментного ¦
¦инструменты и ¦анализа. ¦
¦материалы ¦2) Фотометр для измерения оптической плотности. ¦
¦ ¦3) Полу- или автоматическое устройство для промывания ¦
¦ ¦планшет. ¦
¦ ¦4) Пипетки одноканальные автоматические. ¦
¦ ¦5) Пипетки автоматические многоканальные. ¦
¦ ¦6) Наконечники для автоматических пипеток разного ¦
¦ ¦объема. ¦
¦ ¦7) Термостат суховоздушный. ¦
¦ ¦8) Мерные цилиндры. ¦
¦ ¦9) Ванночки для реагентов или чашки Петри. ¦
¦ ¦10) Крышка для планшета или клейкая лента. ¦
¦ ¦11) Маркер. ¦
¦ ¦12) Вата медицинская гигроскопическая. ¦
¦ ¦13) Бумага фильтровальная. ¦
¦ ¦14) Спирт этиловый 50%, 70%, 96%. ¦
¦ ¦15) Перекись водорода. ¦
¦ ¦16) Контейнеры для сбора твердых и жидких отходов. ¦
¦ ¦17) Средства индивидуальной защиты персонала ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦7. Реагенты ¦Набор реактивов для проведения иммуноферментного ¦
¦ ¦анализа: ¦
¦ ¦- иммуносорбент: рекомбинантные антигены Treponema ¦
¦ ¦pallidum (ультраозвученный, рекомбинантный, ¦
¦ ¦полипептидный); ¦
¦ ¦- инактивированный положительный контрольный образец; ¦
¦ ¦- инактивированный отрицательный контрольный образец; ¦
¦ ¦- конъюгат: смесь рекомбинантных белков Treponema ¦
¦ ¦pallidum и моноклональных антител, конъюгированных с ¦
¦ ¦пероксидазой хрена; ¦
¦ ¦- субстрат; ¦
¦ ¦- концентрат фосфатно-солевого буферного раствора; ¦
¦ ¦- разводящий буферный раствор для сывороток; ¦
¦ ¦- разводящий буферный раствор для конъюгата; ¦
¦ ¦- буферный раствор для субстрата; ¦
¦ ¦- стоп-реагент ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦8. Подготовка к ¦Перед использованием компоненты набора выдержать при ¦
¦проведению анализа¦температуре +18 - 27 °С в течение 30 минут. ¦
¦ ¦В случае выпадения кристаллов во флаконах с реагентами¦
¦ ¦прогреть их при температуре +37 +/- 1 °C до полного ¦
¦ ¦растворения кристаллов, после чего флаконы интенсивно ¦
¦ ¦встряхнуть. ¦
¦ ¦Освободить от упаковочного пакета необходимое для ¦
¦ ¦анализа количество стрипов и закрепить их в рамках. ¦
¦ ¦Неиспользованные стрипы хранить в плотно закрытом ¦
¦ ¦пакете при температуре +2 - 8 °C в течение срока, ¦
¦ ¦указанного производителем. ¦
¦ ¦Разведение концентратов производить в соответствии с ¦
¦ ¦требованиями инструкции по проведению анализа. ¦
¦ ¦Перед внесением проб планшет промыть соответствующим ¦
¦ ¦раствором с помощью автоматического устройства или 8- ¦
¦ ¦канальной автоматической пипетки, если этого требует ¦
¦ ¦инструкция производителя. ¦
¦ ¦Произвести разметку планшета и внести соответствующую ¦
¦ ¦нумерацию в протокол исследования ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦9. Процедура ¦В лунки планшета внести раствор для разведения ¦
¦анализа ¦сыворотки в количестве, указанном производителем. ¦
¦ ¦Внести контрольные и испытуемые образцы в соответствии¦
¦ ¦с разметкой планшета. ¦
¦ ¦Каждый образец после внесения пипетировать до ¦
¦ ¦изменения цвета разводящего раствора, если это ¦
¦ ¦предусмотрено инструкцией. Планшет закрыть крышкой ¦
¦ ¦(заклеить лентой) и инкубировать при +37 °C в течение ¦
¦ ¦периода времени, указанного в инструкции. ¦
¦ ¦Удалить реагентную смесь и промыть планшет раствором ¦
¦ ¦для промывания в соответствии с инструкцией ¦
¦ ¦производителя, остатки влаги удалить. ¦
¦ ¦Во все лунки внести конъюгат в рабочем разведении. ¦
¦ ¦Планшет закрыть крышкой (заклеить лентой) и ¦
¦ ¦инкубировать при +37 °C в течение периода времени, ¦
¦ ¦указанного производителем. ¦
¦ ¦Удалить реагентную смесь и промыть планшет раствором ¦
¦ ¦для промывания, остатки влаги удалить. ¦
¦ ¦В каждую лунку внести субстрат. Инкубировать при ¦
¦ ¦комнатной температуре (+20 - 25 °C) в защищенном от ¦
¦ ¦света месте в течение периода времени, указанного ¦
¦ ¦производителем. ¦
¦ ¦Остановить реакцию путем внесения в каждую лунку стоп-¦
¦ ¦раствора ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦10. Учет и оценка ¦Производятся после остановки реакции на ¦
¦результата ¦спектрофотометре со светофильтром с длиной волны, ¦
¦ ¦указанной производителем. Выведение спектрофотометра ¦
¦ ¦на нулевой уровень осуществляется по воздуху. ¦
¦ ¦Критерии приемлемости результатов: ¦
¦ ¦- значения оптической плотности (ОП) в лунках, с ¦
¦ ¦контролем конъюгата и отрицательным контролем не ¦
¦ ¦превышает указанного в паспорте; ¦
¦ ¦- значения ОП в лунках, с положительным контролем не ¦
¦ ¦ниже указанного в паспорте. ¦
¦ ¦Для учета результатов применяется формула: ¦
¦ ¦ ¦
¦ ¦ ОПкрит = ОПср.(К-) + k, ¦
¦ ¦ ¦
¦ ¦ где ОПкрит - граничное значение ОП; ¦
¦ ¦ ОПср.(К-) - среднее арифметическое значение ОП ¦
¦ ¦отрицательных контрольных проб; ¦
¦ ¦ k - коэффициент, указанный производителем. ¦
¦ ¦Проба считается положительной, если ее ОП превышает ¦
¦ ¦расчетное значение ОПкрит. ¦
¦ ¦Проба считается отрицательной, если ее значение ниже ¦
¦ ¦ОПкрит. ¦
¦ ¦Значение ОП, которое находится в промежутке ОПкрит. ¦
¦ ¦+/-10%, считается неопределенным (серая зона). ¦
¦ ¦Проба с положительным и неопределенным результатами ¦
¦ ¦повторно тестируется не менее чем в 2 лунках, ¦
¦ ¦предпочтительнее - на тест-системе другого ¦
¦ ¦производителя. ¦
¦ ¦Образцы заключения: ¦
¦ ¦1) результат ИФА положительный; ¦
¦ ¦2) результат ИФА отрицательный; ¦
¦ ¦3) результат ИФА неопределенный ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦11. Контроль ¦На преаналитическом этапе оцениваются: ¦
¦качества ¦- взятие биологического материала в соответствии с ¦
¦ ¦требованиями; ¦
¦ ¦- выполнение требований хранения и доставки материала ¦
¦ ¦в лабораторию; ¦
¦ ¦- выполнение требований маркировки проб и соответствия¦
¦ ¦маркировки пробы маркировке направления; ¦
¦ ¦- качество биологического материала (запрещается ¦
¦ ¦тестирование гемолизированных, гиперлипидемичных ¦
¦ ¦(хилезных), гипербилирубинемичных (желтушных) ¦
¦ ¦образцов); ¦
¦ ¦- контроль диагностикума (внешнее состояние, срок ¦
¦ ¦годности), условия и сроки хранения; ¦
¦ ¦- соответствие показателей внешней среды - температура¦
¦ ¦воздуха, влажность; ¦
¦ ¦- качество дистиллированной воды на соответствие ¦
¦ ¦требованиям производителя набора; ¦
¦ ¦- качество лабораторной посуды; ¦
¦ ¦- правильность установки лабораторной мебели ¦
¦ ¦(отсутствие в непосредственной близости источников ¦
¦ ¦вибрации, угол наклона лабораторного стола не более ¦
¦ ¦5°). ¦
¦ ¦На аналитическом этапе оцениваются: ¦
¦ ¦- включение официально зарегистрированных контрольных ¦
¦ ¦материалов с различным уровнем активности ¦
¦ ¦(отрицательные, положительные); ¦
¦ ¦- исполнение методики постановки в соответствии с ¦
¦ ¦инструкцией производителя; ¦
¦ ¦- внесение пробы и реагентов в центр лунки, не касаясь¦
¦ ¦дна и краев; ¦
¦ ¦- качество промывки планшетов: необходимо заполнять ¦
¦ ¦лунки в объеме не менее чем 300 мкл раствора, избегать¦
¦ ¦переполнения и перетекания жидкости в соседние лунки, ¦
¦ ¦тщательно осушить лунки после каждого этапа промывки. ¦
¦ ¦На постаналитическом этапе оцениваются: ¦
¦ ¦- правильность внесения результатов в бланк ¦
¦ ¦исследования; ¦
¦ ¦- своевременное доведение информации до врача, ¦
¦ ¦назначившего исследование ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦12. Нормативные ¦1. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV ¦
¦ссылки ¦групп патогенности с гельминтами. СП 17-129РБ 2000. ¦
¦ ¦2. Применение ультрафиолетового бактерицидного ¦
¦ ¦излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в¦
¦ ¦лечебно-профилактических учреждениях от 01.06.2001 N ¦
¦ ¦26-01-01. ¦
¦ ¦3. Приказ МЗ РБ от 25 ноября 2002 г. N 165 "О ¦
¦ ¦проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями ¦
¦ ¦здравоохранения". ¦
¦ ¦4. Методические указания МУ N 90-9908 "Контроль ¦
¦ ¦качества стерилизации изделий медицинского ¦
¦ ¦назначения", Минск, 1999 г. ¦
¦ ¦5. Санитарные правила и нормы 2.1.7.14-20-2005 ¦
¦ ¦"Правила обращения с медицинскими отходами". ¦
¦ ¦6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 "Методы ¦
¦ ¦микробиологического контроля санитарно-гигиенического ¦
¦ ¦состояния помещений в организациях здравоохранения и ¦
¦ ¦стерильности изделий медицинского назначения". ¦
¦ ¦7. Приказ МЗ РБ N 351 от 16.12.1998 "О пересмотре ¦
¦ ¦ведомственных нормативных актов, регламентирующих ¦
¦ ¦вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД". ¦
¦ ¦8. Инструкция N 113-0801 от 05.09.2001 "Гигиеническая ¦
¦ ¦и хирургическая антисептика кожи рук медицинского ¦
¦ ¦персонала". ¦
¦ ¦9. Постановление Главного государственного ¦
¦ ¦санитарного врача РБ N 71 от 11.07.2003 "Об ¦
¦ ¦утверждении и введении санитарных правил устройства, ¦
¦ ¦содержания и эксплуатации ЛПО" ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦13. Безопасность ¦В соответствии с требованиями нормативных документов ¦
¦персонала ¦ ¦
-------------------+-------------------------------------------------------
--------------------------------
<*> Описана типовая процедура. Если в инструкции производителя указаны иные требования к отбору, хранению и транспортировке проб, процедуре анализа и учету результатов, то необходимо следовать инструкции производителя.
Приложение 8
к приказу Министерства
здравоохранения
Республики Беларусь
20.05.2009 N 488
МЕТОДИКА ВЫЯВЛЕНИЯ СУММАРНЫХ АНТИТЕЛ (ИЛИ АНТИТЕЛ ОДНОГО КЛАССА) К TREPONEMA PALLIDUM МЕТОДОМ РЕАКЦИИ ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ <*>
-------------------+-------------------------------------------------------
¦1. Наименование ¦Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРРА, ТРНА) ¦
¦метода ¦ ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦2. Принцип метода ¦Взаимодействие антител и антигенов Treponema pallidum,¦
¦ ¦конъюгированных с эритроцитами животных, завершается ¦
¦ ¦образованием агглютинатов ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦3. Биологический ¦Нативная сыворотка крови. ¦
¦материал для ¦Спинномозговая жидкость (СМЖ) ¦
¦исследования ¦ ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦4. Условия ¦Пробирки с кровью, СМЖ транспортируются в лабораторию ¦
¦транспортировки ¦в специальном закрытом контейнере при температуре ¦
¦проб ¦+2 - 25 °C. ¦
¦ ¦При невозможности немедленной доставки пробы хранятся ¦
¦ ¦в холодильнике при температуре +2 - 8 °C не более 24 ¦
¦ ¦часов. ¦
¦ ¦В лаборатории первичные пробы исследуются в течение 24¦
¦ ¦часов. При необходимости сохранения образца до 72 ¦
¦ ¦часов отделяется сыворотка и хранится при температуре ¦
¦ ¦+2 - 8 °C. ¦
¦ ¦При необходимости хранения биологического материала в ¦
¦ ¦течение более длительных сроков в лаборатории ¦
¦ ¦производят замораживание проб в маркированных ¦
¦ ¦пробирках типа Эппендорф, предварительно разделив ¦
¦ ¦первичную пробу на несколько дублирующих по 0,5 - 1,0 ¦
¦ ¦мл. Замораживание при температуре -18 - 20 °C ¦
¦ ¦позволяет хранить образцы в течение 1 - 1,5 месяцев, ¦
¦ ¦при температуре -70 °C срок хранения не лимитируется ¦
+------------------+------------------------------------------------------+
¦5. Подготовка проб¦Образцы крови помещают в термостат при +37 °C на 15 - ¦
¦к исследованию ¦30 минут или оставляют при комнатной температуре для ¦
¦ ¦образования сгустка фибрина, затем помещают в ¦
¦ ¦холодильник при +2 - 8 °C на 30 минут, после чего ¦
¦ ¦пробирки с венозной кровью подвергают ¦
¦ ¦центрифугированию в течение 10 минут при скорости ¦
¦ ¦вращения ротора 1000 - 1500 оборотов в минуту. ¦
¦ ¦Сыворотка переносится в другую пробирку для ¦
¦ ¦последующего тестирования. Оттаивание сыворотки крови ¦
| Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 |
карта новых документов |
