НАЙТИ ДОКУМЕНТ
Наказ № 1135 від 19.12.2006Про затвердження положень про відомчі заохочення
Текст документа по состоянию на 2 июля 2009 года
<< Назад |
<<< Главная страница
Стр. 3
6.3.5. Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при
знезараженні поверхонь
Як тест-об'єкти використовують поверхні розміром (10 х 10) см
із різноманітних матеріалів у залежності від призначення
дезінфекційного засобу: дерев'яні, заштукатурені, пофарбовані
масляною або клейовою фарбою, обклеєні шпалерою, а також поверхні
з лінолеуму, кахлю, металу, гуми, пластику, скла тощо.
Досліджувані поверхні піддають механічному очищенню - миють
водою з милом і щіткою, за винятком поверхонь, обклеєних шпалерами
і пофарбованих клейовою фарбою. Останні протирають кілька разів
стерильною серветкою, зволоженою стерильною водопровідною водою.
Після підсихання поверхні стерилізують, розташовують горизонтально
і піпеткою наносять вірусовмісну рідину з розрахунку 0,5 мл на
площу в 100 кв.см, рівномірно розподіляють по поверхні скляним
шпателем. Поверхні підсушують при кімнатних умовах (температура
18-20 град.C і відносна вологість повітря 50-60%).
Виконання досліджень. Розчин досліджуваного дезінфікуючого
засобу наносять на поверхню шляхом зрошення з пульверизатора з і
контролем витраченої рідини. Норма витрати становить 200-250 мл
розчину на 1 кв.м площі поверхні, що обробляється.
Контроль ефективності знезараження здійснюють через
встановлені проміжки часу. Відбір проб проводять шляхом ретельного
протирання зрошених поверхонь зволоженою стерильною марлевою
серветкою (3 х 3 см), а потім сухою (серветки зволожують
фізіологічним розчином або розчином Хенкса з антибіотиками).
Марлеві серветки відмивають у 5 мл нейтралізатора або в стерильній
водопровідній воді, протягом 10 хв. Потім переносять у стерильні
пробірки зі скляними кульками та фізіологічним, струшують впродовж
10 хвилин. Одержаною рідиною заражають 4 клітинні моношари у
пробірках або культуральних планшетах.
Контроль. У контрольних дослідах аналогічно заражені поверхні
зрошують стерильною або кип'яченою водопровідною водою з того ж
розрахунку (200-250 мл/кв.м поверхні), що і дослідні. Відбір проб
та їхню обробку проводять аналогічно дослідним. Для з'ясування
вірусного навантаження при контамінації об'єктів проводять
титрування.
Результат. Результат вважають позитивним при повній
інактивації тест-вірусів на всіх досліджуваних тест-об'єктах.
6.3.6. Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при
знезараженні сечі
При вивченні віруліцидної активності дезінфікуючих засобів
у дослідах із сечею враховують співвідношення дезрозчину і сечі,
концентрацію діючої речовини, час обробки, температуру.
Виконання досліджень. У декілька пробірок вносять по 9 мл
прокип'яченої сечі та додають по 1 мл вірусовмісної рідини.
Розчини досліджуваного дезінфікуючого засобу готують у
концентраціях, що забезпечують віруліцидний ефект при досліді на
тест-об'єктах після 10-15 хв. впливу. Розчини дезінфікуючого
засобу додають до сечі в рівному або подвійному, в порівнянні
з нею, об'ємі. Після закінчення експозицій (наприклад, 15, 30,
60 хв.) піпеткою відбирають зазначену суміш у кількості 1 мл і
переносять у пробірки з 5 мл нейтралізатора. Після ретельного
змішування одержану рідину розбавляють в 10 разів підтримуючим
середовищем та інфікують нею 4 клітині моношари чутливої культури
клітин у пробірках або лунках планшета.
Контролі. Контрольні проби готують аналогічно дослідним,
додаючи до сечі замість дезінфікуючого розчину стерильну воду.
Вірусне навантаження при контамінації сечі в контролі визначають
титруванням.
Результат. Результат випробування вважають позитивним за умов
повної інактивації тест-вірусу в сечі.
6.3.7. Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при
знезараженні фекальних мас
При розробці режимів знезараження фекальних мас враховують
співвідношення дезінфікуючого засобу до знезаражуваної маси, час
обробки, температуру, консистенцію знезаражуваних виділень,
ступінь гомогенізації в процесі знезараження.
Виконання досліджень. Розтирають у ступці 20 г
простерилізованих фекальних мас й додають до 80 мл води. Отриману
20% суспензію фекалій переносять по 9 мл у пробірки і додають по
1 мл вірусовмісної рідини. Дослідження проводять, використовуючи
розчин дезінфектанту в концентрації, що повністю інактивує
тест-вірус в сечі за 30 хвилин.
Підготовлену контаміновану тест-вірусом суспензію фекалій
заливають рівним або подвійним об'ємом дезінфікуючого розчину
відповідної концентрації і струшують впродовж 10 хвилин. Проби
центрифугують при 1500 g протягом 20 хв. Одержану надосадову
рідину у дослідних і Контрольних пробах розбавляють в 10 разів
підтримуючим середовищем і інфікують нею 4 клітинні моношари
чутливої культури клітин у пробірках або лунках планшета.
Контроль. Контрольні проби готують аналогічно дослідним,
додаючи до суспензії фекалій замість дезінфікуючого розчину
стерильну воду. Вірусне навантаження при контамінації фекалій в
контролі визначають титруванням.
Результат. Результат випробування вважають позитивним за умов
повної інактивації тест-вірусу у фекаліях.
6.3.8. Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при
знезараженні води
Виконання досліджень. До стерильної води додають суспензію
6
тест-вірусу до його кінцевої концентрації 10 ТЦД /мл.
50
Дезінфекційний засіб розчиняють у дистильованій воді або
змішують з нею у такому співвідношенні, щоб після додавання до
досліджуваної контамінованої вірусом проби води, його кінцева
концентрація відповідала досліджуваній (або вказаній в інструкції
по застосуванню).
Віруліцидну дію дезінфектанту при знезараженні води вивчають
з білковим та без білкового навантаження в 3 групах досліджень:
без білку, з 0,2% сироваткового альбуміну та 10% сироватки великої
рогатої худоби.
Концентрації дезінфектанту та експозиції обирають так, щоб
результати дослідження показували віруліцидний ефект дезінфектанту
в залежності від його концентрації та часу взаємодії.
Якщо використовується нейтралізація дії дезінфектанту, після
завершення експозиції до суміші дезінфектанту та вірусовмісної
рідини додають рівну кількість розчину нейтралізатора.
Оцінити віруліцидну активність дезінфектанту, особливо якщо
нейтралізація його дії не проводиться, можливо при титруванні
залишкового інфекційного титру вірусу. Одразу після закінчення
експозиції готують розведення досліджуваної проби (води з
дезінфектантом) у кількості, необхідній для титрування залишкового
-1 -6
вірусу (від 10 до 10 ), якими інфікують клітинний моношар.
Визначити віруліцидний ефект дезінфекційного препарату за
умови нейтралізації дезінфектанту можливо також за допомогою
концентрування вірусних часток сірчанокислим алюмінієм (або
ентеросгелем, бентонітом тощо [6]).
Концентрування вірусу сірчанокислим алюмінієм. До
досліджуваної проби води об'ємом 1,0 л додають 2,0 мл 10%
суспензії сірчанокислого алюмінію (Al (SO ) ).
2 4 3
Обробка осаду. Воду залишають при кімнатній температурі
на 4 години або при +4 град.C на 18 годин для осідання
пластівчастого осаду. Надосадову рідину видаляють. Осад
центрифугують при 500 g протягом 10-15 хв.
Елюція вірусних часток. Надосадову рідину видаляють, осад
ресуспендують у 3,0-5,0 мл розчину Хенкса, pH 7,4.
Повторна елюція вірусних часток. У день проведення досліджень
на культурі клітин елюат повторно центрифугують при 500 g протягом
15 хв., надосадову рідину видаляють, осад ресуспендують у 4,0 мл
розчину Хенкса та деконтамінують етиловим ефіром або
антибіотиками. Усе ретельно змішують та залишають у пробірках з
ватними пробками при кімнатній температурі на 10-12 годин. Після
цього відбирають надосадову рідину з дослідної та контрольних проб
і зберігають її при +4 град.C. Одержану надосадову рідину у
дослідних і контрольних пробах розбавляють в 10 разів підтримуючим
середовищем і інфікують по 4 клітині моношари чутливої культури
клітин у пробірках або лунках планшета. Проби інкубують при
37 град.C впродовж 7 днів, щоденно спостерігаючи за проявом ЦПД
тест-вірусу. У разі відсутності ЦПД вірусу, проводять ще 2 сліпих
пасажування.
Контролі:
1. Контроль інфекційної дози вірусу.
2. Контроль інфекційної дози вірусу з білковим навантаженням.
3. Контроль цитотоксичності суміші дезінфектанту та
нейтралізатора.
4. Контроль повноти нейтралізації дезінфектанту.
Результат. При відсутності специфічних змін у культурі клітин
тест-вірус вважають повністю інактивованим. Результат випробування
вважають позитивним при повній інактивації дезінфекційним засобом
тест-вірусу у воді за умов його застосування в концентрації,
передбаченій інструкцією.
6.3.9. Вивчення віруліцидної активності аерозольних
препаратів
Виконання досліджень. Для одержання вірусного аерозолю
використовують вірусовмісну рідину, яку розпилюють у повітрі
експериментальної камери. При продуктивності розпилювача
0,25 мл/хв., розпилення рідини проводять протягом 5 хв. При цьому
в повітрі камери створюється концентрація вірусовмісної рідини
1 мл/куб.м. Вірусне навантаження змінюють у залежності від
розведення вірусовмісної рідини. Для контамінації повітря при
вивченні віруліцидної активності препаратів використовують
-1 -3
вірусовмісну рідину в розведеннях від 10 до 10 .
Для визначення вмісту вірусу в повітрі камери проводять
відбір проб повітря за допомогою аспіратора будь-якої системи
(наприклад, насосу). Проби повітря, що відбираються, зі швидкістю
2-5 л/хв., пропускають через прилад Дяконова або ін., у який
наливають 5 мл стерильного розчину Хенкса з антибіотиками. Після
чого цією рідиною заражають по 4 пробірки з моношаром клітинної
культури. Кількість вірусів у пробах визначають титруванням. Після
інфікування повітря в камеру розпилюють розчини препаратів за
допомогою різної розпилюючої апаратури. Дослідження проводять за
трьома показниками відносної вологості повітря: (20-25%, 50-55% і
80-85%) і температурі повітря в межах від 19 до 22 град.C.
Контролі. Як контроль використовують аерозольні суміші, що
не містять активнодіючого препарату, що розпилюють у камеру в тих
же кількостях. При цьому розмір аерозольних часток повинний бути
однаковим з розміром часток аерозолю препарату. Контрольні
аерозольні суміші, що не містять активнодіючої речовини, не
впливають на вірус, незалежно від концентрації останнього в
повітрі.
Результат. Результат випробування аерозольного
дезінфекційного засобу вважають позитивним при повній інактивації
ним тест-вірусу у повітрі камери за умов його застосування в
концентрації, передбаченій інструкцією.
Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів при
знезараженні рук
Ефективність санітарно-гігієнічної дезінфекції рук оцінюється
при знезараженні рук, штучно контамінованих тест-вірусами.
Виконання досліджень. Завись тест-вірусу у відповідної
концентрації у кількості 0,1 мл необхідно нанести на подушечку
великого пальця і рознести по подушечках інших пальців тієї ж
руки. Після підсихання зависі на пальцях, обидві руки занурюють на
необхідну експозицію у 2 л розчину дослідного препарату, виконуючи
рухи, аналогічні миттю. Потім руки промокають стерильним
фільтрувальним папером та роблять змиви марлевими серветками
(кожну руку окремою серветкою), які нейтралізують у відповідному
нейтралізаторі (якщо нейтралізатор невідомий - використовують
стерильну воду) та поміщають у пробірки з 5 мл розчину Хенкса та
кульками і відмивають, струшуючи протягом 10 хв. Цією рідиною
заражають по 4 пробірки з моношаром клітинної культури.
Контроль. Контролем є змиви, які отримані з аналогічно
контамінованих рук, що піддавалися миттю в 2 л стерильної
водопровідної води.
Результат. Результат випробування вважають позитивним при
повній інактивації дезінфекційним засобом тест-вірусу на руках за
умов його застосування в концентрації, передбаченій інструкцією.
7. Критерії оцінки
Основним показником ефективності дезінфікуючих засобів в
заданих концентраціях і тривалості експозиції при оціночних
(сертифікаційних) дослідженнях є повна відсутність ознак
репродукції вірусу за умов дотримання необхідного титру
(4-7 lg ТЦД /мл), або зниження інфекційного титру тест-вірусу
50
(ів) не менше ніж на 4 lg ТЦД /мл в порівнянні з контролем [5]. У
50
скринінгових дослідженнях (пошук нових дезінфектантів) мінімальною
величиною зниження інфекційного титру тест-вірусу за час
експозиції, яка свідчить про наявність віруліцидної дії, вважають
2 lg ТЦД /мл.
50
Загальну віруліцидну ефективність розраховують як різницю між
титром вірусу в присутності дезінфектанту і його титром в
присутності розчинника:
Е = Тк - Тд, де
Е - загальна віруліцидна ефективність;
Тк - титр вірусу в контролі;
Тд - титр вірусу в суміші вірус/дезінфектант.
В.о. директора
Департаменту організації
санітарно-епідеміологічного
нагляду Л.М.Мухарська
Додаток 1
до п. 2 Методичних
рекомендацій "Визначення
віруліцидної дії
дезінфікуючих засобів"
ВІРУСИ-ЗБУДНИКИ
інфекційних захворювань людини, які враховуються
при проведенні дезінфекційних заходів
-----------------------------------------------------------------------------------------
| Назва вірусу | Будова вірусу | Механізм передачі |Примітка | Наявність |
| |----------------+---------------------------| | засобів |
| |Простий|Складний|Контактно-|Повітряно-|Через| |специфічної |
| | | |побутовий |крапельний|кров | |профілактики|
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Аденовіруси | + | | + | + | + | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Астровіруси | + | | + | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Каліцивіруси | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|- Норовірус | + | | + | + | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|- Саповірус | + | | + | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|- Віруси гепатиту E| + | | + | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Коронавіруси | | + | + | + | | | |
|(включаючи | | | | | | | |
|асоційовані з SARS)| | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Флавівіруси | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|- Віруси гепатиту C| | + | +* | | + |При | |
| | | | | | |статевому| |
| | | | | | |контакті | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус жовтої | | + | | | |При | |
|лихоманки | | | | | |укусах | |
| | | | | | |комах | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Гепаднавіруси | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус гепатиту B | | + | +* | | + |При | |
| | | | | | |статевому| |
| | | | | | |контакті | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Віруси герпесу | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Герпес сімплекс | | + | + | | + | | + |
|віруси (1-2) | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус вітряної | | + | + | + | | | + |
|віспи - | | | | | | | |
|оперізуючого лишаю | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Цитомегаловірус | | + | + | | + | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус Епштейна-Бара| | + | + | | + | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Герпесвірус людини | | + | + | | | | |
|6, 7, 8 типів | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Ортоміксовіруси | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус грипу (A + B)| | + | + | + | | | + |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Паповавірус | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Папіломавірус | + | + | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Поліомавірус | + | + | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Параміксовіруси | | | | | | | |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус кору | | + | + | + | | | + |
|-------------------+-------+--------+----------+----------+-----+---------+------------|
|Вірус епідемічного | | + | + | + | | | + |
|паротиту | | | | | | | |
| Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 | Стр.4 |
<< Назад |
<<< Главная страница
|
